EZfusion同源重組酶多功能試劑盒，新鮮出爐
南京信帆生物所提供的 EZfusion Enzyme 專門為把 PCR 產物快速，定向，有效的克隆到任何目標載體而設計。有效的避免了在克隆過程中遇到的合適內切酶的選擇，化，補平，加 A，使用中間載體等等一系列復雜步驟。
無需連接酶，只需要把目標載體線性化(平末端，粘性末端都可以)，PCR 產物無需任何酶促處理，直接和目標載體混合，20 分鐘一站式解決所有問題。無需藍白班篩選，無需擔心克隆方向，無須擔心陽性克隆比率，隨意挑取克隆，陽性率>99%.使用本試劑盒，可以定向克隆 12kb 的片段。
注意：
可以采用任何聚合酶來得到 PCR 產物，但是，引物和引物二聚體會對 EZfusion 有一定的抑制作用。如果 PCR 反應得到單一的目的條帶，PCR 產物可以用 PCR 純化試劑盒回收；如果 PCR 產生很多非特異性條帶，應該用凝膠回收純化目的條帶。
適用范圍：
1. PCR cloning into any vector
2. Long PCR DNA (up to 12kb) cloning
3. Gene transfer one vector to another
4. High-throughput (HTP) PCR cloning
5. In vitro joing of DNA fragments
線性化載體的制備 載體的*線性化對于重組實驗至關重要，沒有線性化的載體會產生非常高的背景。 線性化后的載體需要過柱純化或者凝膠回收純化。
轉化 ：
1. 新鮮制備的或-70℃下保存的 100ul 感受態(tài)細胞，置于冰上，*解凍后輕輕地將細胞均勻懸浮。
2. 加入 10-12ul 連接液，輕輕混勻，冰上放置 30 分鐘。
3. 42℃水浴 90 秒，冰上放置 2 分鐘。
4. 加 600ul SOC 培養(yǎng)基，37℃ 250rpm 振蕩培養(yǎng)小時。
5. 室溫下 4000rpm 離心 5 分鐘，用吸頭吸掉 500ul 上清液，用剩余的培養(yǎng)基將細胞懸浮。
6. 將細菌均勻細致得涂布在 90mm 平板上。 注：細菌的用量依連接的效率及感受態(tài)細胞的感受率而進行適當調整。
7. 平板在 37℃下正向放置 1 小時后以吸附過多的液體，然后倒置培養(yǎng)過夜。
信帆生物對質量的控制涵蓋生物試劑、放行、市場質量反饋的全過程,包括原輔料、包裝材料、工藝用水、中間過程及成品的質量標準和分析方法的建立、取樣、檢驗和產品穩(wěn)定性考察和市場不良反饋樣品的復核等工作,確保產品的精確度、穩(wěn)定性。我們確保銷售給客戶的產品是能夠符合質量標準,適合客戶要求的產品。
上一篇 : 深入了解大腸桿菌
下一篇 : 對照品和標準品原來深藏這些秘密
在線咨詢