Tris-氯化銨紅細胞裂解液

【產(chǎn)品名稱】 ：Tris-氯化銨·紅細胞裂解液

【產(chǎn)品規(guī)格】 ：100ml /500ml

【儲存條件】 ：4℃

【有效期】 ：12個月

【產(chǎn)品簡介】 ：

在生物科研領域，經(jīng)常需要去除紅細胞，去除紅細胞的方法有多種，如 ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨·紅細胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Tris-氯化銨·紅細胞裂解液(Tris-NH4Cl Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱為 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，是一種從人、鼠 或其他哺乳動物等體內的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為 NH4Cl。

Tris-NH4Cl Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。

本產(chǎn)品僅供科研實驗用，不做其它用途！

【自備材料】 ：

胰蛋白酶、離心機、PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液、胎牛血清

【操作步驟】(僅供參考)：

(一)組織細胞樣本的常規(guī)操作

1、制備細胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞 懸液，離心棄上清。

2、裂解: 加入 3～5 倍細胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟 2 和步驟 3 各一次。

洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的 5 倍以上。

如有必要，重復上述步驟 5 一次，共洗滌 1～2 次。

根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

(二)組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。

2、裂解：加入細胞 5 倍細胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、加入 15～20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4、離心：4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟 2～4 各一次。

6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

(三)血液樣本的常規(guī)操作

1、取新鮮抗凝血，400～500g 離心 5min，棄上清。

2、裂解: 加入 6～10 倍細胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～5min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對于鼠的血液，裂解 1～2min 已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至 4～5min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、洗滌: 根據(jù)實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的 5 倍以上。

6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第 1 步操作，可直接加入 10 倍血液體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 進行第 2 步操作，并在 4℃或室溫裂解 4～15min。對于鼠的血液，裂解 4～5min 已經(jīng)足夠； 對于人的外周血，宜延長裂解時間至 10min，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10 倍體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4～5min 已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至 10min，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。）

2、加入 20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

3、400～500g 離心 5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

【注意事項】 ：

1、制備細胞懸液時應根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。

2、后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內操作。

3、離心步驟盡量在 4℃離心機上操作。

4、常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

5、離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。

6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

Tris-氯化銨紅細胞裂解液