雙鏈DNA中和緩沖液：DNA 的雙鏈?zhǔn)且粋€完整的基因紐帶，在每個細(xì)胞核里都有一套，控制成長規(guī)律。（除了紅血細(xì)胞之類的的細(xì)胞沒有 DNA）單鏈僅僅在細(xì)胞復(fù)制時才會有。細(xì)胞復(fù)制的過程中，紐帶將被打開，由復(fù)制體從蛋白材料中取材，復(fù)制成單鏈 DNA 的另一半。

操作步驟(僅供參考):

1、 按實驗具體要求操作。

2、或按如下步驟將凝膠置于變性溶液(堿性)中進(jìn)行DNA 變性:

①轉(zhuǎn)移到不帶電荷的膜上:a 、將凝膠置于10倍凝膠體積的雙鏈DNA 變性緩沖液中,室溫放置45min ,并不斷輕輕振蕩。b 、用去離子水短暫浸泡凝膠,然后將凝膠浸沒于10倍凝膠體積的DNA 中和緩沖液Ⅰ中,室溫放置30min ,并輕輕振蕩;更換一次DNA 中和緩沖液Ⅰ繼續(xù)浸泡15min 。

②轉(zhuǎn)移到帶電荷的尼龍膜上:a 、將凝膠置于5-10倍凝膠體積的DNA 中和緩沖液Ⅱ中,室溫放置15min ,并不斷輕輕振蕩。b 、更換一次DNA 中和緩沖液Ⅱ繼續(xù)浸泡20min ,并不斷輕輕振蕩。

注意事項:

1、 如果目標(biāo)片段的長度小于20kb ,最好避免進(jìn)行脫嘌呤反應(yīng)。

2、 如果每次的使用量很小,可以適當(dāng)分裝后再使用。

緩沖溶液的配制和應(yīng)用

為了配制一定pH的緩沖溶液，首先選定一個弱酸，它的pKaφ盡可能接近所需配制的緩沖溶液的pH值，然后計算酸與堿的濃度比，根據(jù)此濃度比便可配制所需緩沖溶液。

以上主要以弱酸及其鹽組成的緩沖溶液為例說明它的作用原理、pH計算和配制方法。對于弱堿及其鹽組成的緩沖溶液可采用相同的方法。

緩沖溶液在物質(zhì)分離和成分分析等方面應(yīng)用廣泛，如鑒定Mg2+ 離子時，可用下面的反應(yīng)：

白色磷酸銨鎂沉淀溶于酸，故反應(yīng)需在堿性溶液中進(jìn)行，但堿性太強，可能生成白色Mg（OH）2沉淀，所以反應(yīng)的pH值需控制在一定范圍內(nèi)，因此利用NH3·H2O和NH4Cl組成的緩沖溶液，保持溶液的pH值條件下，進(jìn)行上述反應(yīng)。

雙鏈DNA中和緩沖液